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技術(shù)文章

預(yù)染蛋白marker
   蛋白marker可分為未預(yù)染的Marker即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及預(yù)染的Marker即單色預(yù)染和多色預(yù)染。那么，什么是預(yù)染蛋白marker？預(yù)染蛋白marker為一些純化好的蛋白的混合物.這些蛋白混合物與一種藍(lán)色染料共價(jià)偶聯(lián).可在凝膠電泳時(shí)出現(xiàn)強(qiáng)度均勻的8條帶.同未預(yù)染的蛋白marker相比,預(yù)染蛋白marker因與染料共價(jià)偶聯(lián)而在SDS-PAGE電泳時(shí)的遷移特性發(fā)生某些改變.
    預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)：預(yù)染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物，通過與染料共價(jià)耦聯(lián)，在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn)，這種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以幫助我們在電泳時(shí)、電泳后，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計(jì)遷移率   比如，已知垂直電泳*佳分辨區(qū)域大約在膠的2/3處，如果使用預(yù)染蛋白Marker就可以預(yù)測目標(biāo)蛋白進(jìn)入*佳分辨區(qū)時(shí)停止電泳以得到*佳分辨效果，如果觀察到Marker電泳異常也可以及時(shí)終止電泳，另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否完全，還可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量，所以吸引了許多實(shí)驗(yàn)室人員購買預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)。值得注意的是預(yù)染蛋白Marker與染料共價(jià)耦聯(lián)，所以在不同的緩沖條件下電泳時(shí)遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化，可能導(dǎo)致一些偏差，所以不太適合**定位蛋白  不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白完全一樣，我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小，*后都需要Western來定性，所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶，預(yù)染Marker還是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用。
    預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以分為兩種：單色預(yù)染和多色預(yù)染，其實(shí)區(qū)別就在于幫助在實(shí)驗(yàn)過程中辨認(rèn)某個(gè)條帶的大小—Marker條帶越多參考價(jià)值越大，可就越難辨認(rèn)區(qū)分，如果用不同的顏色來區(qū)別就比較好辨認(rèn)。單色的Marker通常是利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小的。還有一點(diǎn)特別要注意，由于轉(zhuǎn)膜是一個(gè)將膠里的Marker濃縮在潔白的膜上，所以需要的上樣量相對少一些，如果想要在電泳過程中看到美麗的“彩虹”，或者單色的Marker往往需要比說明書里多加一些Marker的。
非預(yù)染蛋白marker和預(yù)染蛋白marker有什么區(qū)別
    非預(yù)染蛋白marker電泳時(shí)看不到條帶，染色后才能看到，而預(yù)染蛋白marker會(huì)有特定的某些蛋白條帶帶有顏色，電泳過程中可以觀察到，還有在WB過程中也起到轉(zhuǎn)膜是否成功的指示作用。
    預(yù)染的marker的分子量在不同濃度膠上跑出來是不一樣的，這個(gè)叫表觀分子量。未預(yù)染的marker是*準(zhǔn)確的，如果只做wb，預(yù)染的marker就夠了，每次都能觀察轉(zhuǎn)膜情況。
    其他都是些細(xì)節(jié)上的區(qū)別，比如有些預(yù)染蛋白marker會(huì)做成彩虹色的，以便區(qū)別分子量大小有些預(yù)染蛋白marker的條帶比較多等等。